核糖核酸酶H（ribonuclease：H或RNase：H）是核酸内切酶，特异性水解与DNA杂交的RNA上的磷酸二酯键，产生带有3′-OH和5′-P末端的产物，不降解单链核酸、dsDNA或dsRNA。许多酶附带有该酶的活性，如AMV反转录酶。 主要用于在cDNA克隆合成第二链之前去除RNA；在脱氧核苷酸指导下在特异位点切割RNA；分析体外多聚腺嘌呤反应的产物，在与Oligo（T）或poly（dT）杂交后去掉poly（A）尾，从而在电泳中产生清晰的条带。

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